Abstract
The virulence of a combination of Beauveria bassiana and Triflumuron on R. prolixus and R. pallescens was evaluated. The bioassays consisted of spraying the insects with conidial suspensions of B. bassiana in concentrations of 3X105, 1X107, and 3X108 conidia/ml, with Triflumuron insecticide at 0,05; 0,025; and 0,0125 µg/µl and with a mixture of Triflumuron and B. bassiana. The mortality response and conidiation of the fungi on the triatomine were compared as a function of time and the concentration applied. The results were variable: both R. proxilus and R. pallescens differed significantly between all B. bassiana treatments at concentrations of 3X108 (Xβ=148.4), 1X107 (Xβ=111.6) and 3X105 conidia/ml (X2=195.5); 3x108 (Xβ=174.0), 1x107 (Xβ=14.35) and 3x105 conidia/ml (Xβ=18.85), respectively. R. prolixus exhibited shorter survival times than R. pallescens at concentrations of 3X108 and 1X107 conidia/ml of B. bassiana. The conidiation of B. bassiana on the insect differed significantly among treatments and species of insect, with R. prolixus showing shorter times to conidiation. At 3X108 conidia/ml concentration of B. bassiana, either alone or with the insecticide, there was a lower time to conidiation in both species. The importance of these results is highlighted within one of the tenants put forward in integrated pest management programs initially established by Hurpin in 1966, which affirms that treating insects with high concentrations of conidia and low insecticide concentrations makes them more susceptible to conidiation.
Introducción
Los insectos hemipteros hematófagos de la familia Reduviidae, R. pallescens Barber y R. prolixus (Stahl) son dos de los vectores de mayor importancia para Colombia como transmisores de la enfermedad de Chagas a nivel silvestre y domiciliar (Lent y Wygodzinsky 1979; Angulo y Sandoval 2001). Se encuen- tran distribuidos principalmente en el norte, centro y oriente del país (Guhl y Nicholls 2001).
La enfermedad de Chagas o tripanoso- miasis americana es un problema de sa- lud pública en la zona oriental del territorio colombiano situado por deba- jo de los 2.000 msnm. Afecta el 7% de la población y ocasiona, en el país, costos económicos altos en el tratamiento de la cardiopatía chagásica crónica, una de las anomalías de esta enfermedad (Guhl y Nicholls 2001). En América latina se es- tima que 100 millones de personas se encuentran en zonas de alto riesgo, 18 millones de personas están infectadas con el parásito Tripanosoma cruzi, y anual- mente aparecen 500.000 casos (Schofield 1997). En Colombia aproximadamente 1,3 millones de personas están infecta- das, 3,6 millones viven en zonas de alto riesgo y anualmente aparecen 40.000 ca- sos (Moncayo 1997). A nivel social y eco- nómico, esta enfermedad parasitaria se considera como la más importante del continente americano (World Bank 1993).
En ausencia de vacuna o de tratamiento eficaz contra la enfermedad el control antivectorial se ha basado en interrumpir la transmisión del parásito en el domi- cilio y el peridomicilio, utilizando in- secticidas químicos como piretroides, organoclorados, organofosforados y carbamatos (Díaz y Schofield 1999). Este control ha sido empleado en Colombia en el área domiciliar avalado por el Mi- nisterio de Salud (Schmunis et al. 1996; Guhl y Nicholls 2001), a pesar de la resis- tencia adquirida por parte del vector y de la contaminación ambiental ocasionada (OMS 1991). Entre las alternativas de lu- cha antivectorial se encuentra el uso de los hongos entomopatógenos como Beauveria bassiana (Bals.) Vuill. y Metarhizium anisopliae (Anderson et al. 1989; Romaña y Fargues 1992; Fargues y Luz 2000; Lecuona et al. 2001; Pineda et al. 2002).
Una de las orientaciones de la lucha inte- grada contra insectos de importancia para el hombre consiste en aplicar simultánea- mente gérmenes entomopatógenos con un agente plaguicida. Este método de lucha biológica fue explorado en Rusia (Ferron 1970) sobre la hipótesis de que dosis variables de insecticidas alteran el estado fisiológico del insecto y estable- cen consecutivamente una intoxicación que sensibiliza al establecimiento de la enfermedad por el agente biológico (Telenga et al. 1968).
Uno de los agentes microbianos más uti- lizados en el control de plagas ha sido el hongo entomopatógeno B. bassiana. En Colombia su efecto ha sido evaluado es- pecialmente sobre la broca del café, Hypothenemus hampei (Ferrari) (Coleop- tera: Scolytidae), y así mismo su compa- tibilidad con insecticidas, herbicidas y funguicidas, encontrándose un efecto fungistático con la mayoría de los insec- ticidas evaluados y sólo en unos pocos un efecto deletéreo (Rivera et al. 1994; Ibarra y Varela 2002; Vásquez et al. 2004).
En estudios realizados por Pristavko (1966) se demostró la alta eficiencia del hongo B. bassiana en concentraciones de 5x104 conidios/ml en asociación con pequeñas dosis de DDT (0,00016 mg i.a.) en el control de Leptinotarsa decem- lineata (Say) (Coleoptera: Chrysomeli- dae). El resultado de esta acción conjunta del insecticida (DDT), el hongo, la microbiota intestinal en el insecto y la variación del pH de la hemolinfa contri- buyen en el proceso patológico del desa- rrollo de la enfermedad (Rivera et al. 1994). B. bassiana también ha sido eva- luado sobre vectores de importancia en salud humana como vectores del parási- to que produce la enfermedad de Chagas (Romaña 1992; Vásquez et al. 2004).
El Triflumuron 2 cloro-N-[[4-(Trifluoro- metoxy) fenil]amino]Carbonil]benzami- da es un insecticida del grupo de las benzoilfenilurea (BFU) que se comporta como un inhibidor de la síntesis de quitina de los insectos. Ha sido evaluado en combinación con hongos ento- mopatógenos como B. bassiana, demos- trando compatibilidad siendo ésta dependiente del tipo de químico y con- centración utilizada (Fargues 1973; Anderson et al. 1989; Rivera et al. 1994; Soltani et al. 1996; Vásquez et al. 2004).
El insecticida Triflumuron ha sido eva- luado sobre diferentes especies de insec- tos (ninfas o larvas) de importancia económica, encontrándose que la super- vivencia de los insectos varía dependien- do de la concentración del insecticida. Triflumuron dificulta la formación de quitina en los insectos holometábolos y hemimetábolos. Utilizado a concentra- ciones altas tiene propiedades ovicidas y es más efectivo a medida que aumenta la edad de los huevos (Chang 1979; Hammann y Sirrenberg 1980; Mohsen y Medhi 1989; Smith y Grigarick 1989).
Partiendo de la compatibilidad existente entre el Triflumuron y el hongo entomo- patógeno B. bassiana se planteó como objetivo evaluar el efecto de esta mezcla sobre la supervivencia de ninfas de R. prolixus y R. pallescens de V estado de desarrollo, en comparación con el hongo sólo y el Triflumuron sólo, sobre los mis- mos vectores. Como hipótesis se planteó que la supervivencia y conidiación de R. prolixus y R. pallescens se realiza en un tiempo menor a lo esperado que cuando se aplica el entomopatógeno sólo.
Materiales y Métodos
El estudio se realizó en el laboratorio de Micología y Control Biológico del Ins- tituto de Biología de la Universidad de Antioquia durante el 2003.
Insectos
Las colonias de triatominos (R. prolixus y R. pallescens) procedieron del labora- torio de Control Biológico del Instituto de Biología de la Universidad de Antio- quia, criados y mantenidos en condicio- nes de humedad relativa y temperatura óptimos para su crecimiento y desarrollo (80% HR y 27°C) en cámara climatizada (WTBbinder 78532 Tuttlingen/Germa- ny). Para el estudio se seleccionaron 4 lotes de insectos, cada uno con 15 ninfas de V estado de desarrollo. Los insectos se alimentaron dos veces por semana sobre gallina (Gallus gallus) durante una hora y veinticuatro horas antes de cada ensa- yo para estimular la producción de la hor- mona de muda.
Hongo entomopatógeno
El aislamiento del hongo entomo- patógeno B. bassiana UdeA13 se obtuvo a partir del cadáver de un triatomino R. pallescens colectado en la región de San Onofre (Departamento de Sucre, Colom- bia). El aislamiento se mantuvo en Agar Saboraud Dextrosa (Oxoid Ltda., Basinas- toke, Hampshire) a 25°C durante 10 días para obtener los conidios. Los conidios se cosecharon utilizando una barra de vidrio y una solución acuosa estéril de 0,5% de Tween 80 (Sigma, St. Louis, MO, USA) como diluyente para dispersar y mantener su uniformidad. Las suspensio- nes fueron diluidas en agua destilada es- téril y homogenizadas en un vortex Heidolph Reax Control a 2500 rpm (Germany 09441/707-124) y se contaron en la cámara de Neubauer (Boeco- Germany). Con base en los resultados ob- tenidos por Romaña y Fargues (1992) y Pineda et al. (2002) se prepararon tres concentraciones del hongo 3x108, 1x107 y 3x105 conidios/ml.
Insecticida
El Triflumuron (StarycideR S.C. 480, Bayer), conocido también como SIR 8514, sintetizado en Alemania por el la- boratorio de investigaciones químicas de Bayer en 1975, fue obtenido en la casa comercial (IVANAGRO) en la ciudad de Medellín (Colombia). El producto se pre- senta como una suspensión concentrada (480g/l), a partir de la cual se prepararon las concentraciones de 0,05; 0,025 y 0,0125 µg/µl, que se definieron con base en los resultados de trabajos anteriores (Vásquez et al. 2002). La empresa Bayer recomienda para el control de insectos, especialmente larvas, utilizar StarycideR 100 ml en 100 1 de agua, con la que se pueden fumigar alrededor de 20 casas (Hammann y Sirrenberg 1980).
Aplicación de la combinación de B. bassiana y Triflumuron sobre insectos
Bioensayos
Para el ensayo se tomaron lotes de 15 nin- fas con cuatro repeticiones de cada concentración evaluada. El hongo B. bassiana y el insecticida se utilizaron como testigos positivos y el agua destila- da estéril como testigo negativo. Los in- sectos tratados fueron mantenidos dentro de cristalizadores plásticos de 288 cm³ cubiertos con muselina, a cada uno de los cuales se les introdujo una lámina de car- tón paja para facilitar el desplazamiento y la alimentación de los insectos (Pineda et al. 2002).
La aplicación de los tratamientos se rea- lizó mediante el método de aspersión uti- lizando un sistema emulador de la Torre de Pulverización de Burgerjon (1956), con un ajuste de presión de 6 psi, un vo- lumen de 30 ml y un tiempo de 1 a 2 minutos por aspersión para todos los en- sayos. Los lotes de Insectos Tratamiento se colocaron sobre un pequeño platón incorporado herméticamente a la base de la torre de pulverización, girando mien- tras se hizo la aspersión para garantizar homogenidad en la aplicación de la so- lución. Después de ser asperjada la solu- ción se continuó el platón siguió girando por uno o dos minutos más para permitir la caída de la nube sobre los insectos tra- tados. Diariamente, durante un mes, se controló la supervivencia de los insectos y/o la aparición de la muda y posible pre- sencia de malformaciones de los insec- tos supervivientes al tratamiento.
Análisis estadístico
Para tener una buena comprensión de las respuestas obtenidas en la investigación tanto de supervivencia como de coni- diación se codificó como grupo cada tra- tamiento a saber: como grupo 1 la solución fúngica sola (3x108, 1x107 y 3x105 conidios/ml), como grupos 2, 3, 4 la combinación de cada concentración del hongo y el Triflumuron y como gru- pos 5, 6 y 7 el Triflumuron sólo (0,0125; 0,0250 y 0,050 μg/µl).
El análisis de supervivencia para R. prolixus y R. pallescens se realizó utili- zando la curva del análisis de superviven- cia de Kaplan y Meier y la prueba de Gehan generalizada para todos los trata- mientos, con el paquete estadístico Statistica 98 (Statsoft Inc., Tulsa, USA). Para la comparación estadística de las di- ferentes curvas de supervivencia se apli- có la corrección de Bonferroni suponiendo un nivel de significancia de a=0,05. Para cada especie primero se analizaron todos los tratamientos entre sí, luego cada gru- po y finalmente se compararon los grupos más relevantes según los resultados en- contrados. La base de comparación se hizo partiendo de la concentración de la solu- ción conidial de B. bassiana (3x108, 1x107 y 3x105 conidios/ml).
Resultados y Discusión
La respuesta de supervivencia de ninfas de V estado de desarrollo de R. prolixus y R. pallescens al ser sometidas a los trata- mientos presentaron diferencias signifi- cativas en cada especie así:
Para R. prolixus, en la concentración 3x108 se presentaron diferencias signifi- cativas entre los tratamientos 1, 2-4 y 5- 7 (Xβ=148.4 y P<0.05). El menor tiempo de supervivencia lo presentó el trata- miento 1 (B. bassiana), mientras que los tratamientos del 2-4 y 5-7 presentaron TL50 mayores: entre 6,0-7,5 y 29 días, res- pectivamente (Tabla 1).
Respuesta de supervivencia de ninfas de R. prolixus y R. pallescens (de V estado de desarrollo) inducida por los diferentes tratamientos. N = 60
Grupos tratamientos: 1. B. bassiana; 2. B. bassiana con la concentración 0,0125 ug/ul de Triflumuron 3. B. bassiana con la concentración 0,0250 µg/µl e Triflumuron 4. B. bassiana con la concentración 0,050 ug/ul de Triflumuron; 5. Concentración 0,0125 µg/µl de Triflumuron; 6. Concentración 0,0250 µg/µl de Triflumuron y 7. Concentración 0,050 µg/µl de Triflumuron. *Letras diferentes indican que las medianas son estadísticamente diferentes.
Para la concentración de 1x107 conidios/ ml igualmente se encontraron diferencias significativas entre todos los tratamien- tos 1-7 (Xβ=111.6 y P<0.05). En la con- centración 1x107 conidios/ml hubo diferencias estadísticas entre los trata- mientos 1-4 y 5-7, con un TL50 que varió entre 6,5-8,0 y 29 días respectivamente (Tabla 1).
Para la concentración de 3x105 conidios/ ml la comparación entre todos los trata- mientos mostró diferencias significativas (Xβ=195.5 y P<0.05). Los tratamientos 1 y 3 mostraron diferencias con respecto a los tratamientos 5 y 6 (Xβ=26.3 y P<0.05) (Tabla 1). Los tratamientos 2, 4 y 7 tuvie- ron diferencias estadísticas con el trata- miento 1 (Xβ=195.5 y P<0.05). Así mismo estos tratamientos presentaron diferencias significativas con el 5 y 6 (Xβ=56.3 y P<0.05) (Tabla 1). El TL50 mayor lo presentó el tratamiento 5 y 6 (29 días) mientras el menor lo presentaron los tra- tamientos 4 y 7.
En R. pallescens para la concentración de 3x108 conidios/ml se encontraron igualmente diferencias significativas entre todos los tratamientos (Xβ=14.35 y P<0.05). No se encontraron diferencias significativas al comparar los tratamien- tos 5-7, con una TL50 entre 10-11 días, ni entre los tratamientos 2-4 con TL50 entre 6-7 días (Tabla 1).
Para la concentración de 1x107 conidios/ ml se encontraron diferencias estadísti- cas entre los siete tratamientos (Xβ=14.35 y P<0.05). Entre los tratamientos 2-7 no se encontraron diferencias significativas, en donde los TL50 oscilaron entre 6,5 y 8 días. B. bassiana presentó un TL50 de 9 días (Tabla 1).
La concentración de 3x105 conidios/ml presentó diferencias significativas entre los siete tratamientos (Xβ=18.85 y P<0.05). B. bassiana sólo tuvo un TL50 de 9 días. Al comparar este resultado con los demás tratamientos se encontró que no hubo diferencia estadística entre los tratamientos 1, 5, 6 y 7 con TL50 que os- cilaron entre 7 y 9 días. No se encontra- ron diferencias estadísticas entre los tratamientos 2, 3 y 4 mostrando TL50 en- tre 8-9 días (Tabla 1).
Respecto a la conidiación en R. prolixus se encontraron diferencias significativas en las concentraciones 3x108 y 3x105 conidios/ml (Xβ=15.94 y P<0.05 y X2=22.67 y P<0.05) respectivamente. En la concentración de 1x107 conidios/ml no se hallaron diferencias entre el trata- miento 1 y los tratamientos 2-4, arrojan- do un TC50 (tiempo de conidiación) entre 7,5 y 9 días (Tabla 2).
Tiempos de conidiación de B. bassiana con respecto a cada tratamiento y a cada especie de Triatomino
Grupos Tratamiento: 1. B. bassiana; 2. B. bassiana con la concentración 0,0125 µg/µl de Triflumuron 3. B. bassiana con la concentración 0,0250 µg/µl 1 de Triflumuron 4. B. bassiana con la concentración 0,050 µg/µl de Triflumuron. *Letras diferentes indican que las medianas son estadísticamente diferentes.
Para R. pallescens se encontraron dife- rencias significativas en las tres concen- traciones (Xβ=174.0 y P<0.05). Para la concentración de 3x108 y 1x107 coni- dios/ml se encontraron diferencias entre el tratamiento 1 y los tratamientos 2-4 con TC50 entre 7,5 y 10 días. En la con- centración 3x105 conidios/ml se observó diferencia estadística entre los cuatro tra- tamientos, así: hubo diferencia entre el tratamiento 1 y 2, entre el tratamiento 2 y 4, y se encontró similitud entre los trata- mientos 2-4 y 3-4. Los tratamientos 2 y 3 presentaron el mismo TC50 de 9 días, y los tratamientos 1 y 4 TC50 de 10 días (Tabla 2).
Al comparar la respuesta entre ambas es- pecies frente a la aplicación de la mezcla se encontró que para R. prolixus, la conidiación del hongo sobre el insecto se demoró más para expresarse a una me- nor concentración de B. bassiana.
Los investigadores Pineda et al. (2002) evaluaron a R. ecuadoriensis con B. ba- ssiana encontrando un TL50 de 6 días para la concentración de 3x108 conidios/ml frente a R. prolixus, el cual presentó en este estudio un TL50 de 5 días bajo la misma concentración y para el mismo ais- lamiento. Esta similitud en los resulta- dos podría explicarse por la pertenencia de las dos especies a un mismo género y con características de hábitat parecidas ya que R. prolixus está adaptado a am- bientes domiciliares y R. ecuadoriensis tanto al silvestre como al domiciliar (Pi- neda et al. 2002).
La respuesta de los insectos (superviven- cia) a la aplicación de la mezcla compa- rándola con la aplicación del hongo sólo fue muy variable teniendo en cuenta que se presentan diferencias entre uno y cua- tro días para todas las concentraciones evaluadas y en las dos especies de triatominos. Esta respuesta de similitud en el comportamiento de la mezcla fren- te al hongo sólo, podría deberse al daño que ocasiona Triflumuron sobre la cutí- cula del insecto facilitando de esta forma la entrada del tubo germinal de la espora en el cuerpo del triatomino (Castellanos 1997).
Este resultado es relevante cuando se pien- sa en los principios del manejo integra- do de plagas (MIP) que parten de la utilización de dos componentes como es un insecticida a dosis subletales y un microorganismo, en este caso un hongo entomopatógeno a dosis altas que igual- mente no son dañinas al medio ambien- te. Se espera que con la utilización de los dos componentes que se complementen en el MIP, asociado al trabajo con la co- munidad implicada en el problema, se reduzcan los daños ocasionados por los insectos de importancia y no se afecte en gran medida a los ecosistemas.
El hecho de que la germinación del hon- go sobre el cadáver del triatomino fue en algunas concentraciones inhibida lige- ramente (datos no mostrados) cuando se realizó el tratamiento con el insecticida, podría deberse a una acción fungistática de Triflumuron sobre B. bassiana. Esto teniendo en cuenta que los hongos entomopatógenos tienen en su pared quitina, de forma que pasado algún tiem- po de adaptación y resistencia del hongo a la acción del químico, continúa con su proceso de germinación y crecimiento micelial (Castellanos 1997). De esta ma- nera finalmente lograría sobrepasar el porcentaje de germinación y conidiación del tratamiento con el hongo sólo sobre los triatominos, como se observó en el presente estudio.
Anderson et al. (1989) en el estudio rea- lizado sobre el escarabajo de la papa en- contraron que B. bassiana asociado a Triflumuron, Abamectin, y Turingiensis no fue inhibido y su acción conjunta so- bre el insecto blanco no mostró gran diferencia en la mortalidad entre B. bassiana sólo y la combinación con los agentes químicos. Adicionalmente la in- cidencia de la conidiación tampoco difirió entre los dos tratamientos; sin em- bargo, la acción conjunta del hongo y el agente químico introducen múltiples fac- tores de mortalidad, lo que puede repre- sentar una ventaja en el manejo de plagas y retrasar alguna expresión de resisten- cia a nuevos insecticidas. Estos resulta- dos fueron similares con los hallados en este estudio cuando se encontró que la expresión de la conidiación en R. prolixus y R. pallescens no difirió entre los dos tratamientos; sin embargo nuestros resul- tados de mortalidad en los insectos trata- dos presentaron diferencias con respecto a los encontrados por Anderson et al. (1989) sobre el coleóptero.
La supervivencia de los insectos trata- dos con Triflumuron sólo, varió para cada especie evaluada. A mayor concentración del insecticida aplicado la superviven- cia se redujo. Fue cuestionable la respues- ta que presentó Triflumuron sólo sobre R. prolixus frente a la supervivencia. Este resultado no se podría explicar de forma certera y se puede suponer una falla hu- mana en la preparación de las diferentes diluciones del insecticida antes de su aplicación. Sin embargo, la respuesta de R. pallescens fue más homogénea y po- dría dar bases para comprender el efecto de este insecticida sobre los triatominos.
Las concentraciones de Triflumuron evaluadas en el presente estudio son muy bajas; diez veces por debajo de la dosificación recomendada por la casa fa- bricante (Bayer) para el control de in- sectos (0,48 µg/µl en 100 1 para rociar 20 casas), lo que podría explicar la re- ducción del efecto letal de Triflumuron sobre los triatominos (Hammann y Sirrenberg 1980), tanto en su aplicación sólo como en combinación con el hon- go. Este efecto deletéreo y letal se evi- denció en la morfología de los insectos que pasaron al estado adulto o murieron en su intento o aquellos que sobrevivie- ron no más de 30 días postratamiento. Chang (1979), Hammann y Sirrenberg (1980), Picollo de Villar et al. (1987), Soltani et al. (1996) y Vásquez et al. (2002) evaluaron Triflumuron sobre di- ferentes especies de insectos reportan- do un alto porcentaje de adultos o ninfas con daños morfológicos antes y después de mudar totalmente. Los daños morfo- lógicos encontrados en los insectos en el presente trabajo se vieron especial- mente en escutelo, probóscide, genitalia, tejido conectivo, y en mayor proporción en las alas, concordando estos resulta- dos con los obtenidos por los investiga- dores anteriores, teniendo en cuenta que Triflumuron es larvicida por excelencia.
Para R. prolixus la solución fúngica sola ejerció un efecto mayor de mortalidad en las dos primeras concentraciones 3x108 y 1x107 conidios/ml, seguido por el efecto letal de la mezcla en estas dos mismas con- centraciones y por último el insecticida que produjo una mayor supervivencia de las ninfas tratadas. La gran diferencia en los TL50 entre los tratamientos 1-4 con res- pecto a los tratamientos 5-7 (Triflumuron) se podría explicar primero porque como se dijo antes, las concentraciones de Triflumuron utilizadas en este estudio son bajas con respecto a las concentraciones recomendadas para que actúe como un insecticida. Adicionalmente el efecto de un regulador de crecimiento depende del momento (en su metamorfosis) y la con- centración aplicada, puesto que son in- secticidas más específicos que los hasta ahora utilizados para control de insectos de importancia para el hombre (Hammann y Sirrenberg 1980).
Los investigadores Romaña y Fargues (1992), Arroyave (1995) y Pineda et al. (2002) realizaron estudios en ninfas de I y V estado de desarrollo de Rhodnius utili- zando las tres concentraciones de B. bassiana evaluadas en este trabajo, encon- trando TL50 desde 4,63 a 7 días y una conidiación del 100%. Los resultados de tiempos de conidiación de este estudio no coinciden totalmente con los anterio- res trabajos, ya que la aplicación de la mezcla y el hongo sólo presentaron tiem- pos medios de conidiación después de los siete días. Las especies de triatominos eva- luadas en todos los anteriores estudios fueron diferentes, pero del mismo género. Adicionalmente la forma de aplicación del inóculo fúngico varió en este estudio, en donde se realizó por aspersión y en los anteriores trabajos fueron realizadas de forma indirecta a través de lonas de algo- dón inoculadas con el hongo para depo- sitar allí los insectos tratamiento.
Lecuona et al. (2001) evaluó B. bassiana a concentración de 1x108 conidios/ml sobre T. infestans principal vector de la enfermedad de Chagas para Argentina encontrando tiempos de mortalidad en- tre 6,5 y 7,3 días con un 100% de morta- lidad. Estos resultados fueron similares a los del presente estudio en los tiempos de mortalidad, pero difiriendo con R. pallescens donde los tiempos de morta- lidad fueron superiores a 8 días.
En cuanto a las respuestas de conidiación sobre los cadáveres de los insectos de ambas especies la muscardina de B. bassiana apareció al segundo día de es- tar los insectos en cámara húmeda. Sin embargo, en esta conidiación podría de- cirse que aumentó gradualmente el desa- rrollo del micelio sobre el insecto. Se observaron además diferencias desde el punto de vista cualitativo (datos no pre- sentados); así la muscardina blanca apa- reció más rápido sobre el cadáver del insecto con la aplicación de la mezcla que con el hongo sólo; su textura fue más tupida con un área de invasión más extensa, empezando por las áreas inter- segmentales principalmente patas, proboscide, escutelo y finalmente abdo- men y tejido conectivo, según lo descri- to por Tanada y Kaya (1993); en contraste con el comportamiento del tratamiento con el hongo sólo, donde su invasión apareció en igual orden pero en las áreas intersegmentales, la muscardina apareció con menos densidad y más polvoso. Es- tos resultados fueron similares con los de Vásquez et al. (2005), cuando se evaluó el comportamiento de B. bassiana UdeA13 sobre R. prolixus de V estado de desarro- llo a las mismas concentraciones evalua- das en este trabajo.
La mortalidad de R. prolixus y R. pallescens asociada a la aplicación de B. bassiana en combinación con Triflumuron dependió en gran medida de la alta concentración del hongo y baja del in- secticida aplicado. R. pallescens tuvo mayor susceptibilidad al efecto de la mezcla del insecticida y el hongo, espe- cialmente en las concentraciones 3x108 y 1x107 conidios/ml. La concentración 3x108 conidios/ml de B. bassiana utili- zado sólo o en combinación produjo en menor tiempo la conidiación en ambas especies de triatominos.
Aunque dentro de la hipótesis planteada al inicio de este trabajo se esperaba que el efecto de la mezcla del insecticida a concentraciones subletales y el hongo entomopatógeno a concentraciones altas fuera mayor al efecto causado por la apli- cación del hongo o el insecticida solos, se encontró que el efecto de la aplica- ción de la mezcla sobre la supervivencia de los insectos fue levemente mayor so- bre los otros dos parámetros evaluados; lo que sugiere realizar otras pruebas en laboratorio y en campo para evaluar que otros factores pueden aumentar o dismi- nuir la respuesta de los agentes involu- crados en este estudio.
En la literatura revisada se encontraron estudios relacionados con el efecto de insecticidas sobre insectos plaga de im- portancia económica y la patogenicidad de hongos entomopatógenos sobre es- tos. Hay pocos estudios relacionados con el efecto causado por la utilización conjunta de insecticidas y hongos entomopatógenos sobre insectos. Den- tro del manejo integrado de plagas, la utilización de ambos (el insecticida y el microorganismo), como el modelo eva- luado en este estudio, podrían servir como una base para futuras investiga- ciones constituyéndose en una alterna- tiva menos costosa.
Footnotes
Agradecimientos
Los autores agradecen a los profesores Fabio Pineda G., Ana Isabel Gutiérrez y Nadya Cardona por el aporte en la redac- ción del artículo y Abel Díaz Cadavid por el análisis estadístico de la investiga- ción. A la Corporación Académica para el Estudio de Patologías Tropicales, al CODI y a los investigadores del Grupo de Micología y de Control Biológico del Instituto de Biología de la Universidad de Antioquia por el apoyo logístico y la financiación de esta investigación.