Abstract
Organophosphate insecticides have played a very important role in the control of Aedes aegypti, vector of dengue fever and dengue haemorrhagic fever in Venezuela and other American countries. For more than 20 years in Venezuela, Temephos has been used as a larvicide and Malathion as an adultcide in control campaigns for this vector. For these reasons we selected five strains of A. aegypti from four Venezuelan states: Trujillo (PTO and SM), Zulia (Z), Falcón (F) and Táchira (TB), to determine levels of resistance to Temephos. Bioassays were conducted with stage IV larvae testing five insecticide concentrations, according to the WHO methodology. After determining the range of resistance, strains TB, Z, F and SM were susceptible with FR50 values below 5. The strain PTO is resistant (6,3 fold). The results suggest that these populations should be under continual surveillance to observe any change in level of resistance to Temephos. Additionally, it is necessary to know the response of any A. aegypti population to be controlled with this insecticide in Venezuela, and that way guarantee its efficacy.
Keywords
Introducción
Avilan (2004) considera el dengue clásico y el dengue hemorrágico como enfermedades reemergentes al analizar el incremento de los casos notificados hasta 60 veces, la hiperendemicidad de los virus 1, 2 y 4 y aislamiento del virus tipo 3 en Nicaragua, Panamá, Costa Rica, Honduras, El Salvador y Venezuela. En este último país, según cifras del Ministerio de Salud durante el año 2005 se detectaron 37.684 casos (6,3% hemorrágico) lo que sugiere un incremento de la casuística en un 36,6% con respecto al año 2004. Este incremento, según el Director de Vigilancia Epidemiológica del Ministerio de Salud de Venezuela se debió a los largos periodos de lluvia ocurridos durante el año y se sugirió como estrategia campañas para la reducción de criaderos y educación sanitaria (García 2005).
Las medidas de reducción de criaderos y los programas de saneamiento ambiental, tal como lo señalaran Montada et al. (2005) aunque son importantes dentro de las estrategias, no han sido suficientes para el control de Aedes aegypti (Linnaeus), cuyo control se ha logrado principalmente por métodos químicos. Sin embargo, el uso continuo de insecticidas químico clorados en la década de los 70, trajo como consecuencia el desarrollo de altos niveles de resistencia al DDT y otros organoclorados, por lo que en los programas de control se introduce otro grupo de insecticidas, los organofosforados, específicamente Temephos granulado aplicado en recipientes de agua doméstica y considerado uno de los mejores químicos controladores de estadios inmaduros de Aedes aegypti y concomitantemente Malathion para el control de adultos.
Desafortunadamente en los últimos años Chávez et al. (2005); Braga et al. (2004); Rodríguez et al. (1999) y Mazzarri y Georghiou (1995) han reportado poblaciones resistentes al Temephos en Cuba, Brasil, Perú y Venezuela y debido a los programas extensivos (durante 15 años o más) de rociamiento con Malathion en algunas áreas del caribe, poblaciones de A. aegypti han desarrollado diferentes niveles de resistencia a este insecticida (Rawlins 1998; Mazzarri y Georghiou 1995; Mekiura et al. 1991; Rawlins y Ragoonansingh 1990; Georghiou et al. 1987).
En Venezuela los estudios de monitoreo de resistencia a insecticidas han revelado que la especie ha desarrollado resistencia a diferentes líneas de insecticidas; tan tempranamente como en 1958 se conoció que A. aegypti era resistente al DDT (Quaterman y Schoof 1958). Posteriormente, Mouchet (1967) refiere resistencia al dieldrin/BHC y Georghiou et al. (1987) a organofosforados y carbamatos. Mazzarri y Georghiou (1995) detectaron poblaciones de A. aegypti de los estados Aragua y Falcón resistentes a Temephos, Malathion, Pirimiphos-methyl, Chlorpyrifos, Propoxur, Permethrin y Lambdacyhalothrin, y recientemente Pérez et al. (2001) refiere que poblaciones de esta especie en el estado Aragua son resistentes a los piretroides lambdacyhalotrina, cyflutrina y deltametrina.
Esta situación de variabilidad en la susceptibilidad de A. aegypti en los diferentes estados venezolanos a los insecticidas químicos, nos ha motivado a evaluar la susceptibilidad y/o resistencia al Temephos de cinco poblaciones de este vector procedentes de cuatro estados del occidente del país: Trujillo, Zulia, Falcón y Táchira donde una alta casuística de dengue y dengue hemorrágico es reportada.
Materiales y Métodos
Se evaluaron seis cepas de Aedes aegypti, una de referencia y cinco de campo procedentes de cuatro estados de la región occidental de Venezuela.
Cepa Rockefeller: cepa de referencia susceptible, que fue gentilmente cedida por los Drs. Gary Clark y Roberto Barrera del Laboratorio del CDC de San Juan de Puerto Rico. En la tabla 1 se presentan las localidades y ubicaciones geográficas de las cepas de campo. Las cepas PTO y TB se obtuvieron mediante búsqueda activa en floreros y contenedores de agua en cementerios y las restantes se colectaron de contenedores de agua, y todo aquello que pudiera ser considerado un criadero de A. aegypti en las diferentes localidades.
Procedencia de las cepas de campo.
Las colonias se establecieron a finales del año 2004 y se mantuvieron en el insectario del Centro de Investigaciones “José Witremundo Torrealba” del Núcleo “Rafael Rangel” de la Universidad de los Andes, Venezuela, bajo condiciones controladas de temperatura 26 ± 2°C y 65% de humedad relativa. El insecticida Temephos 500-E, 50% CE, fue suministrado por la Dra. Darjaniva Molina del Instituto de Altos Estudios “Dr. Arnoldo Gabaldón”, Maracay-Venezuela.
Los bioensayos se realizaron siguiendo la metodología de la Organización Mundial de la Salud (World Health Organization 1981). Se evaluaron cinco concentraciones que oscilaron entre 0,002 ppm y 0,02 ppm, las cuales ocasionaron entre el 2 y 98% de mortalidad, utilizando veinte larvas de cuarto estadio temprano de cada cepa estudiada mediante cinco réplicas para un total de 100 larvas por concentración. Para la evaluación de la cepa de referencia Rockefeller, el rango de concentraciones osciló entre 0,008 ppm y 0,002 ppm. Todas las soluciones se ajustaron a un volumen final de 1ml con acetona la cual se añadió a 99 ml de agua. Un grupo control fue llevado a la par con los grupos experimentales tratándolo solo con acetona, la cual no causó mortalidad en las larvas. Este ensayo se repitió en tres ocasiones en tres días. La lectura de las mortalidades se realizó a las 24 horas y los resultados se procesaron mediante el Probit analysis program (Raymond, 1985) para obtener las concentraciones letales 50 y 95.
Para evaluar la resistencia al Temephos de las cinco cepas silvestres de Aedes aegypti se calcularon los factores de resistencia (FR)50, por comparación de las concentraciones letales 50 de las cepas de campo con la cepa de referencia, mediante la siguiente fórmula:
FR50 = CL50 cepa de campo / CL50 cepa susceptible (Rockefeller).
La categorización de las cepas de campo fue hecha siguiendo los criterios de la Organización Mundial de la Salud (1981): FR < 5 = Susceptible y FR > 5 = Resistente.
Resultados
En la tabla 2 se muestran los rangos de las concentraciones letales 50 y 95, pendientes de las líneas de regresión Probit-Log y factores de resistencia para Temephos en las cepas de Aedes aegypti procedentes de los estados Trujillo, Zulia, Falcón y Táchira en Venezuela en comparación con la cepa de referencia susceptible.
Concentraciones letales y factores de resistencia al Temephos en larvas de Aedes aegypti de cuatro estados del occidente de Venezuela para el año 2005.
DE: Desviación estándar, IC: Intervalos de confianza p = 0,05, b: Pendiente.
Las cepas Táriba (TB), Zulia (Z), Falcón (F) y Trujillo (SM) fueron susceptibles al Temephos, con bajos valores en los FR50; 2,24; 1,14; 1,60 y 0,86 respectivamente. Los valores obtenidos en las pendientes de las rectas de regresión, oscilaron entre 3,36 y 4,57 demostrando una respuesta heterogénea de estas cepas de campo con respecto a la cepa de referencia. Con respecto a la cepa Paramito del estado Trujillo los individuos de esta población mostraron resistencia al Temephos con un FR50 6,34 y el alto valor de la pendiente de la recta de regresión (7,71) nos indica que esta población responde en forma homogénea frente al insecticida.
Discusión
Los resultados revelan que las cepas de A. aegypti procedentes de los estados venezolanos Táchira, Zulia y Falcón responden en forma similar frente al Temephos, uno de los insecticidas más utilizados para su control en fase inmadura, coincidiendo con los hallazgos referidos por Mazzarri y Georghiou (1995) en poblaciones de Coro, estado Falcón y Maracay, estado Aragua, cuyos valores en los FR50 fueron menores a cinco, lo que sugiere que son susceptibles al insecticida. En otros países de América también se han encontrando poblaciones de A. aegypti con bajos niveles de resistencia al Temephos, tal es el caso del Perú, donde Chávez et al. (2005) reportan poblaciones procedentes de las localidades el Porvenir y Sultana con FR50 de 1,45X y 1,67X respectivamente.
Con las poblaciones obtenidas del estado Trujillo encontramos diferencias en la respuesta al Temephos, así tenemos, que la cepa Paramito (PTO) procedente de un área altamente urbanizada, sujeta a constante presión con insecticidas y con altos índices de infestación del vector y procedencia de la mayoría de los casos de dengue en el estado Trujillo según el Ministerio de Salud (2005), mostró resistencia con un FR50 de 6,34, mientras que la población San Martín, procedente de un área rural, con grandes problemas sanitarios, de poco o ningún acceso a las medidas de control, mostró susceptibilidad al insecticida, probablemente esta diferencia pueda asociarse a la ausencia de presión de selección ejercida sobre la población de San Martín, ratificando lo referido por otros investigadores de que la continua presión con insecticidas conlleva al desarrollo de resistencia (Chávez et al. 2005; Bisset 2002).
La homogeneidad en la respuesta de los ejemplares de la cepa PTO frente al larvicida, expresada a través de un alto valor de la pendiente de la recta de regresión (b = 7,71) sugieren una alta frecuencia de individuos RR en la población, sobre este aspecto deben llevarse a cabo pruebas bioquímicas para determinar posibles mecanismos de resistencia al insecticida con la finalidad de detectar con precisión el nivel genotípico y diferenciación de individuos resistentes homocigóticos (Bisset 2002).
En Venezuela Bisset et al. (2001) encontraron poblaciones de A. aegypti procedente del estado Apure resistentes al Temephos con un FR50 de 11,1X; al igual que se han registrado moderados niveles de resistencia en poblaciones de Cuba y Brasil con FR50 de 5,9X y 6,3X respectivamente, pero es importante destacar que en estos tres países aun se encuentran poblaciones susceptibles a este larvicida (Bisset et al. 2001; Campos y Andrade 2001). Sobre la base de estos resultados y los obtenidos en el presente estudio, se presenta una diversidad en la susceptibilidad de A. aegypti en las diferentes poblaciones de este vector, por lo que se hace necesario e indispensable realizar monitoreos continuos en poblaciones de A. aegypti en las diferentes localidades de los estados venezolanos antes de la aplicación del Temephos y así hacer un buen uso de este insecticida en los programas de control.
Footnotes
Agradecimientos
Los autores agradecen el financiamiento otorgado por el Consejo de Desarrollo Científico, Humanístico y Tecnológico de la Universidad de los Andes, Venezuela Proyecto Código C-339-03-03-C. Así mismo agradecen al comité de evaluadores de la Revista Colombiana de Entomología por la revisión y crítica del manuscrito.