Abstract
In the context of the integrated vector management, chemical control continues to be an important strategy if it is used in rational and controlled ways. The objective of the present work was to determine the susceptibility of Aedes aegypti larvae to formulations used in public health of Temephos and Triflumuron in three areas of Cali city. The populations analyzed were highly susceptible to both insecticides. Mortality ratios for Temephos ranged between 98.7 and 96.0%, displaying an apparent reversion of the resistance showed in 1996. Based on the results it is possible to suggest the alternate use of both products in the frame of an integrated management program but with previous evaluation of the Triflumuron cost-benefit grounds.
Introducción
Los métodos de prevención y control de vectores y en especial de Aedes aegypti (Linnaeus) se basan principalmente en el manejo ambiental, la promoción de la educación y la participación comunitaria, el control biológico y la aplicación de insecticidas químicos. Aunque en el último decenio se ha enfatizado en el enfoque ambiental (ordenamiento del medio), comunitario y biológico, todavía el control químico es considerado un elemento importante en el manejo integrado de las enfermedades transmitidas por artrópodos. La incorporación del control químico a las estrategias de control integrado de vectores debe basarse en su eficacia, sostenibilidad, costos y grado de susceptibilidad de la población de vectores a combatir.
Las pruebas de susceptibilidad son ensayos realizados regularmente en el laboratorio con el propósito de valorar la respuesta de las poblaciones naturales de un organismo a un insecticida. Los resultados de estos ensayos biológicos indican si la población expuesta al insecticida dado, permanece susceptible o muestra resistencia. La resistencia es percibida, en condiciones de campo, como una reducción en el control obtenido normalmente, con la dosis del insecticida que fue efectiva cuando éste fue introducido por primera vez. En consecuencia, las pruebas de susceptibilidad estandarizadas de la Organización Mundial de la Salud (OMS), deben practicarse periódicamente, como parte integral del programa de control de vectores, con la finalidad de detectar oportunamente los cambios en la susceptibilidad, valorar el nivel de resistencia a los insecticidas en uso para hacer los ajustes en el programa de control de vectores (Brown y Pal 1973).
El Temefos (Abate ®), en gránulos de arena al 1%, se viene aplicando en el área urbana de la ciudad de Cali para el control de Ae. aegypti, desde 1979. Un informe de Suárez et al. (1996) mostró en un barrio del norte de la ciudad de Cali, la existencia de poblaciones de larvas de esta especie, resistentes a este insecticida. En el presente trabajo se analizan los resultados de la valoración de la respuesta de tres poblaciones naturales de Ae. aegypti de la ciudad de Cali a Temefos, un larvicida aplicado regularmente por la Secretaría de Salud Pública Municipal (SSPM). Por otro lado se evalúa el grado de susceptibilidad al Triflumuron (Starycide®), un inhibidor de síntesis de quitina que afecta el proceso de desarrollo pre-imagal del insecto.
Materiales y Métodos
Se colonizaron tres poblaciones de Ae. aegypti, procedentes de diferentes sectores de la ciudad de Cali (barrio Marroquín I, II y Floralia) y la cepa susceptible de referencia, Rockefeller, la cual fue suministrada por el Center for Desease Control (CDC), San Juan Laboratories, Puerto Rico. Con las filiales F1 o F2 se desarrolló el protocolo estándar de la Organización Mundial de la Salud, para medir la susceptibilidad o resistencia de las poblaciones de larvas de mosquitos a los insecticidas organofosforados y a los inhibidores de crecimiento (WHO 1981, 1981a).
Las larvas de Ae. aegypti se evaluaron con diferentes dosis del organofosforado Temefos (Abate ®) y con el inhibidor de crecimiento Triflumuron (Starycide®).
El establecimiento de las concentraciones iniciales de los dos larvicidas se realizó exponiendo lotes de 25 larvas de mosquitos de tercer instar tardío o cuarto temprano, de las cepas de Cali y Rockefeller. Las concentraciones finalmente probadas se presentan en las tablas 1 y 2, para Temefos y Triflumuron, respectivamente. Las larvas se depositaron en vasos de precipitado con 249 ml de agua filtrada, a la cual se le agregó 1 ml de cada concentración del insecticida. Se hicieron tres repeticiones por concentración y tres réplicas de cada prueba, en días diferentes. Las condiciones de temperatura durante la prueba oscilaron entre 22° C y 24° C. Los datos obtenidos en cada prueba se registraron en los formularios diseñados para este propósito. A partir de los datos de mortalidad de larvas y la dosis del insecticida utilizada, se estableció la línea base o línea de regresión dosis - mortalidad.
Porcentajes de mortalidad de larvas de tres cepas de Ae. aegypti observadas a diferentes dosis de Temefos, en el año de 1998
Mortalidad en control Rockefeller = 0.0%.
Mortalidad en control Cali - Marroquín = 0.0%.
Mortalidad en control Cali - Floralia = 0.0%.
Porcentajes de mortalidad corregidos y esperados de larvas de dos cepas de Ae. aegypti obtenidas con diferentes dosis de Triflumuron (IGR), bajo condiciones de laboratorio
Mortalidad en el control Rockefeller = 3.5%
Mortalidad en el control Cali - Marroquín = 3.1%
Los resultados se analizaron mediante la transformación a escala probit de los datos (Finney 1964) utilizando el programa de Raymond (1985). Los porcentajes de mortalidad se ajustaron con respecto a la observada en los testigos, mediante la fórmula de Abbott. Para determinar un cambio en la susceptibilidad de una población, se calculó la tasa o razón de resistencia, la cual se define como la CL50 0 CL95 de una cepa silvestre sobre la de la cepa de referencia o susceptible. Valores mayores a la unidad son indicadores de mayor tolerancia al insecticida.
Resultados
Temefos
Los ensayos se iniciaron a partir de la dosis diagnóstica de 0.0125 mg/l, con la cual se obtuvo el 100.0% de mortalidad. Para establecer la línea base, a partir de la dosis diagnóstica, se calcularon otras que son presentadas en la tabla 1.
Las líneas de regresión de las poblaciones colectadas en Cali-Marroquín (sector oriental), Cali-Floralia (sector norte) y la cepa de referencia Rockefeller, indicaron que la cepa Rockefeller tuvo una respuesta homogénea, la cual es propia de cepas susceptibles (Fig. 1). Al compararla con la línea de regresión de la cepa Cali-Marroquín y Cali-Floralia no se observó un desplazamiento significativo hacia mayores dosis y las pendientes obtenidas fueron tan o más elevadas que la cepa susceptible (Tabla 3). Este resultado demostró que las poblaciones evaluadas en este estudio son tan susceptibles a Temefos como la cepa Rockefeller. Con excepción de la cepa Cali-Marroquín, cuyas dosis presentaron un alto valor de X2 (Tabla 1) las CL50 y CL95 presentaron una margen estrecha entre los intervalos de confianza. Por otro lado, todas presentaron una elevada pendiente, propia de una respuesta homogénea de la población, y un error estándar bajo para las cepas susceptible y Cali (norte), que es indicador de un buen ajuste de los datos para esas dos cepas (Tabla 3).
Concentraciones letales CL50 y CL95 de Temefos sobre larvas de tres cepas de Ae. aegypti, bajo condiciones de laboratorio
Concentración letal del 50% (mg/l)
Intervalo de confianza del 95% (mg/l)
Pendiente de la línea de regresión ± el error estándar.
Líneas de regresión dosis-mortalidad obtenidas con Temefos en dos cepas de Ae. aegypti de la ciudad de Cali, comparadas con la cepa susceptible (Rockefeller).
El criterio operacional de resistencia se define como la supervivencia del 20% o más de individuos de una población expuesta a la dosis diagnóstica. La dosis diagnóstica de 0.0125 mg/l de Temefos es el doble de la concentración del insecticida que normalmente ocasiona el 99.99% de mortalidad de Ae. aegypti. Las mortalidades alcanzadas exponiendo la población Cali-Marroquín y Cali-Floralia a la dosis diagnóstica fueron de 98.7% y 96.0%, respectivamente, corroborando la existencia de cepas susceptibles, lo cual es un resultado contrario a lo observado por Suárez et al. (1996) en esta misma ciudad.
La evolución de la resistencia de Ae. aegypti en Cali desde 1996 hasta 1999 es presentada en la tabla 4. En la evaluación realizada por Suárez et al. en 1996 se detectó resistencia en dos poblaciones de Ae. aegypti procedentes del norte y sur de la ciudad, con una TR95 de 12.4 y 9.4 respectivamente, lo cual hizo que las aplicaciones de Temefos fueran suspendidas. Después de casi 3 años se ha observado una disminución de la TR95, hasta llegar a 1.9 en abril de 1999.
Tasas de resistencia (TR) a Temefos observadas en varias poblaciones de Ae. aegypti de Cali 1996-1999
De acuerdo con los anteriores resultados, se ha producido una reversión en los niveles de susceptibilidad. Aparentemente, al suspender las aplicaciones regulares de este larvicida, las poblaciones han ido poco a poco retornando a un grado de susceptibilidad normal. Todos los criterios aplicados demuestran que la población de Ae. aegypti de la ciudad de Cali es en estos momentos susceptible a Temefos.
Considerando que el fenómeno de la resistencia es una característica heredable, que se establece como respuesta a una acción selectiva, la eliminación del factor selectivo (insecticida) puede facilitar la reaparición de la sensibilidad (OMS 1964). En poblaciones abundantes la reversión es consecuencia de selección contra genotipos resistentes en presencia de insectos susceptibles procedentes de poblaciones no tratadas. Cuando se detecta resistencia, un factor en favor de la supresión de un insecticida, al menos temporal, es la de que cuando ésta se produce por primera vez, los genotipos resistentes generalmente no son los mejores adaptados al medio ambiente y por lo tanto son más fáciles de eliminar al suprimirse la acción selectiva del insecticida en favor de los más susceptibles. El reemplazo por un nuevo insecticida es discutible, ya que éste no siempre es eficaz contra los genotipos resistentes generados con el otro insecticida sobre todo si la resistencia es cruzada. Para el caso de Ae. aegypti, al detectarse resistencia a insecticidas como el Temefos, es recomendable que durante un periodo de tiempo prudente se recurra al uso de insumos de control biológico y ordenamiento ambiental. Los insecticidas deben ser usados posteriormente y de manera espaciada en puntos estratégicos que no abarquen todos los hábitats alrededor de estos puntos, para aumentar la probabilidad de infiltración de insectos susceptibles que alteren las frecuencias genotípicas de manera regular y de esa manera demorar o evitar reaparición sucesiva de la resistencia al insecticida involucrado en el manejo integrado de vectores.
Con base en la consideración anterior y los resultados observados en este trabajo se propone el esquema de manejo integrado de vectores que combine: 1) Educación comunitaria, para contribuir a un plan de ordenamiento ambiental, 2) Uso de biolarvicidas en formulaciones que garanticen mayor residualidad y 3) Restablecimiento de las aplicaciones con Temefos pero manteniendo los cuidados siguientes: a) No utilizarlo en todas las áreas de control, es decir mantener poblaciones sin exponer al insecticida. b) Hacer vigilancia periódica del grado de susceptibilidad a este insecticida. c) Buscar otras alternativas de productos químicos, preferiblemente no organofosforados, para reducir la posibilidad de resistencia.
Triflumuron
Para calcular la línea base o línea de regresión dosis-mortalidad, se calcularon las concentraciones preliminares entre 0.1600 y 0.0032 mg/l, con las que se alcanzó una mortalidad del 100.0% para la cepa Rockefeller. A partir de esta información se evaluaron las dosis presentadas en la tabla 2 y los ajustes de las dosis de la cepa Cali-Marroquín.
Aunque para el análisis de la cepa Rockefeller fue necesario interpolar datos de dos de las dosis empleadas, dado los altos valores de los Xβ obtenidos, las líneas de regresión de ambas cepas (Rockefeller y Cali-Marroquín) presentaron pendientes relativamente similares (Fig. 2 y Tabla 5). Ambas ecuaciones indicaron una respuesta homogénea, lo cual es un comportamiento propio de cepas susceptibles.
Concentraciones letales CL50 y CL95 de Triflumuron sobre larvas de tres cepas de Ae. aegypti, bajo condiciones de laboratorio
Concentración letal del 50% (mg/l)
Intervalo de confianza del 95% (mg/l)
Pendiente de la línea de regresión ± el error estándar.
Con la cepa Rockefeller y Cali-Marroquín de Ae. aegypti las respectivas CL50 fueron de 0.00037 mg/l y 0.00026mg/l. Un informe previo (no publicado) suministrado por la compañía Bayer, preparado por Alfredo F. Martínez, del Laboratorio de Parasitología y Ecotoxicología (LPE) de Buenos Aires, indicó una Cl50=0.014 mg/l para larvas de Ae. aegypti local, la cual es más alta que la calculada en la evaluación realizada en Cali. Los resultados anteriores confirman que la población de Cali-Marroquín es completamente susceptible a Triflumuron. A partir de la dosis letal 99 (CL99) obtenida con la cepa Rockefeller se propone una dosis diagnóstica de 0.00420 mg/l
Línea de regresión dosis-mortalidad obtenidas con Triflumuron en una cepa de Ae. aegypti de la ciudad de Cali, comparada con la cepa susceptible (Rockefeller).